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蛋白質(zhì)聚集——Nicomp 動(dòng)態(tài)光散射系統(tǒng)

 更新時(shí)間:2024-12-12  點(diǎn)擊量:180

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摘要:

蛋白質(zhì)溶液中的聚集被證明會(huì)產(chǎn)生有害影響。對(duì)較大的聚集體可以進(jìn)行測(cè)量,但對(duì) 0.150 納米到 2 微米范圍內(nèi)的較小聚集體則難以量化。Nicomp® 動(dòng)態(tài)光散射(DLS)技術(shù)可以證明聚集的存在,但不能提供聚集體絕對(duì)濃度的任何信息。





正文內(nèi)容

生物治療藥物已被證明容易誘發(fā)抗藥抗體(ADA)。有證據(jù)表明,蛋白質(zhì)聚合體能夠增強(qiáng)免疫原性,從而增強(qiáng)對(duì)單體形式蛋白質(zhì)的免疫反應(yīng)。


生物治療蛋白質(zhì)的制造商通常通過(guò)一系列步驟制備注射藥物,包括:

1.蛋白質(zhì)合成和純化

2.冷凍干燥以在運(yùn)輸過(guò)程中保持穩(wěn)定

3.注射前的復(fù)配


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凍干的好處是可以穩(wěn)定蛋白質(zhì)以便運(yùn)輸,但并不清楚凍干蛋白質(zhì)在重組后是否會(huì)恢復(fù)到單聚態(tài)。如果在此過(guò)程中有少量蛋白質(zhì)聚集,就有可能誘發(fā)病人對(duì)治療過(guò)程產(chǎn)生免疫反應(yīng)。


如果能開(kāi)發(fā)出一種簡(jiǎn)單的方法,在復(fù)溶后以大小與濃度直方圖的形式測(cè)量聚集程度,就能在配制過(guò)程中對(duì)這些藥物進(jìn)行篩選,以確保復(fù)溶過(guò)程能釋放單體而不產(chǎn)生大量聚集。


圖 1 顯示了對(duì) 200 納米處疫苗聚集體的分析。在大約 300 納米處可以清楚地看到聚集。三次運(yùn)行清楚地顯示了 200 納米處物質(zhì)的損失,同時(shí) 300 納米處的峰值也在增加。


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圖1.疫苗 300nm處聚集體




圖 2 顯示,在約 600 納米處也可見(jiàn)聚集。請(qǐng)注意,200 納米處的物質(zhì)濃度是 600 納米處聚集濃度的十萬(wàn)倍。


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 2.疫苗600nm處聚集體




圖 3 顯示了通過(guò)改變顯示比例而獲得的更精確的濃度測(cè)量結(jié)果。從圖中可以看出,疫苗 2 在 600 納米處的聚集物濃度是疫苗 1 的 5 倍。


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圖3.疫苗1與疫苗2的比較




有了這些信息,我們就可以確定這種疫苗制劑的最佳配制條件,以避免聚集并降低對(duì)疫苗產(chǎn)生意外免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。


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4.微米范圍內(nèi)低水平的聚集體





最后一張圖顯示了另一組分析結(jié)果,表明某些蛋白質(zhì)即使在 5 微米的范圍內(nèi)也會(huì)出現(xiàn)低水平的聚集,而實(shí)際濃度相對(duì)于天然蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)可能非常低,以至于無(wú)法通過(guò)其他方法檢測(cè)到。



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