脂肪乳注射液的粒度檢測及藥典標(biāo)準(zhǔn)

［摘要］分別采用動(dòng)態(tài)光散射法( DLS) 、經(jīng)典光散射法、基于單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)的光阻法( LO /SPOS) 與電阻法，對(duì)脂肪乳注射液的乳粒進(jìn)行考察，主要檢查粒徑分布及顆粒濃度。結(jié)果表明經(jīng)典光散射法與動(dòng)態(tài)光散射法( DLS) 測定乳粒的平均粒徑以及粒徑分布結(jié)果基本一致，LO /SPOS 測定大粒子(＞5μm) 的結(jié)果相較于電阻法(傳統(tǒng)計(jì)數(shù)器)更好，優(yōu)勢更加明顯。

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1. 概念

脂肪乳注射液又名脂肪乳注射液(C14～24)，是由注射用大豆油(14～24)個(gè)碳原子的脂肪酸構(gòu)成的長鏈甘油三酯) 經(jīng)注射用蛋黃卵磷脂乳化，并加注射用甘油制成的滅菌乳狀液體。為能量補(bǔ)充藥，為機(jī)體提供能量和必需脂肪酸，用于胃腸外營養(yǎng)補(bǔ)充能量及必需脂肪酸，預(yù)防和治療人體必需脂肪酸缺乏癥，也為經(jīng)口服途徑不能維持和恢復(fù)正常必需脂肪酸水平的患者提供必需脂肪酸。注射用脂肪乳是一種良好的藥物載體，具有增強(qiáng)藥物穩(wěn)定性，減少副反應(yīng)，具備一定靶向性等優(yōu)點(diǎn)，在臨床應(yīng)用和研究開發(fā)領(lǐng)域發(fā)展迅速。

乳粒大小和分布是脂肪乳注射液質(zhì)量控制的核心內(nèi)容，它和注射液的穩(wěn)定性、有效性和安全性密切相關(guān)。

2. 藥典標(biāo)準(zhǔn)

我國脂肪乳注射液現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《中華人民共和國衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)》1998年版 2 部第 6 冊(生化藥品第1分冊) (簡稱部頒標(biāo)準(zhǔn))和企業(yè)注冊標(biāo)準(zhǔn)(國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH13472008)。USP35版收載了脂肪乳注射液( lipid injectable emulsion)，是對(duì)所有乳劑的一個(gè)通用規(guī)定。在“乳粒”檢查項(xiàng)下，企業(yè)注冊標(biāo)準(zhǔn)與部頒標(biāo)準(zhǔn)一致，與USP35標(biāo)準(zhǔn)相比，差別較為明顯，尤其是在控制大粒子方面， 測定方法和限度都有明顯差異。國內(nèi)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)采用計(jì)數(shù)器方法，分別對(duì)大于1μm和5μm 顆粒進(jìn)行控制; 而USP35則采用光阻法對(duì)大于5μm顆粒的重量百分比含量進(jìn)行控制。

方法一：采用動(dòng)態(tài)光散射或者米氏散射原理測試脂肪乳平均粒徑(MDD)，規(guī)定強(qiáng)度徑 Int-Weight不得超過500nm；

方法二：采用光阻法(Light Obscuration)測得PFAT5值：統(tǒng)計(jì)1.8μm-50μm的脂肪乳顆粒體積在油相體積中的比例。測試三次，PFAT5值不得超過0.05%。

3. 檢測方法

目前市場主流的乳粒分析儀主要有BECKMAN COULTER計(jì)數(shù)器、PSS380&780APS激光粒度測定儀以及MALVER N2000 激光粒度測定儀。

1）電阻法：BECKMAN COULTER計(jì)數(shù)器測定原理為電阻法。當(dāng)一個(gè)顆粒穿過小孔時(shí)，在感應(yīng)區(qū)中一個(gè)類似體積的電解液被該顆粒所置換。小孔所產(chǎn)生的通過電解液的電流流動(dòng)的阻力就改變了，這種阻力上的改變以一個(gè)脈沖的形式測量。計(jì)數(shù)的脈沖數(shù)量與穿過小孔的顆粒的實(shí)際數(shù)量直接相關(guān)。因此可以通過脈沖數(shù)量計(jì)算通過小孔的粒子數(shù)。英國藥典丙泊酚脂肪乳注射液項(xiàng)下采用該方法。該法優(yōu)點(diǎn)是分辨率高測量速度快，重復(fù)性好，缺點(diǎn)是容易發(fā)生堵孔故障，需要根據(jù)測定粒子的大小更換小孔管等。

2）動(dòng)態(tài)光散射：PSS 380 激 光 粒 度 測 定 儀 采 用 動(dòng) 態(tài) 光 散 射 ( dynamic light scattering) 原理。測量的依據(jù)是粒子的布朗運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致光強(qiáng)的波動(dòng)，微小粒子懸浮在液體中會(huì)無規(guī)則地運(yùn)動(dòng)， 布朗運(yùn)動(dòng)的速度依賴于粒子的大小和媒體粘度，粒子越小，媒體粘度越小，布朗運(yùn)動(dòng)越快。光通過膠體時(shí)，粒子會(huì)將光散射， 在一定角度下可以檢測到光信號(hào)，所檢測到的信號(hào)是多個(gè)散射光子疊加后的結(jié)果。后通過光強(qiáng)波動(dòng)變化和光強(qiáng)相關(guān)函數(shù)計(jì)算出粒徑及其分布。

3）光阻法：當(dāng)有一定微粒的液體流經(jīng)一狹長檢測區(qū)時(shí)，與檢測區(qū)垂直的入射光被微粒所阻擋，產(chǎn)生一定程度的遮光現(xiàn)象，從而投影在光電接收器件上的透射光強(qiáng)度會(huì)有所減弱，傳感器輸出的脈沖信號(hào)大小與阻擋微粒的截面積成正比，不同截面積的粒子產(chǎn)生不 同的輸出信號(hào)．經(jīng)計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理后。給出所測粒徑的分布結(jié)果。粒徑測量范圍可達(dá)2- 400 um。當(dāng)測量光源采用激光光源時(shí)．入射光強(qiáng)度會(huì)有所增加，可以提高檢測分辨率。

4）經(jīng)典光散射：MALVERN 2000激光粒度測定儀采用經(jīng)典光散射原理， 測量的依據(jù)是米氏散射理論和弗朗霍夫近似理論，建立在一定的理論和數(shù)學(xué)模型之上，測得的結(jié)果是按照光強(qiáng)信號(hào)與角度的函數(shù)關(guān)系推算得到的顆粒群體的相對(duì)粒徑分布。若乳粒中大于

5μm的乳粒確實(shí)存在但相對(duì)于整體來說含量很低的時(shí)候， 使用激光粒度測定儀可能因?yàn)闊o法得到有效的光強(qiáng)信號(hào)而誤以為沒有大粒子。該法測定結(jié)果受3個(gè)參數(shù)影響，分別是折射率，遮光度及吸收率。

4. 結(jié)論

目前市場基于單顆粒光傳感技術(shù)的光阻法( LO /SPOP) 測定大粒子具有明顯的優(yōu)勢，通過光學(xué)設(shè)備對(duì)不透光的粒子進(jìn)行測定，可直接測定樣品，結(jié)果較為直接和直觀; 而電阻法需要添加電解質(zhì)，通過顆粒帶電荷的多少來判斷，并通過折算，因此相對(duì)來說較為復(fù)雜，而且電解質(zhì)可能會(huì)使乳粒聚集，測得的結(jié)果可能比光阻法高，從而影響判斷。

乳粒的大小與粒徑分布決定了脂肪乳注射液的物理穩(wěn)定性、臨床安全性和有效性， 是一項(xiàng)重要的質(zhì)控指標(biāo)， 通過本研究結(jié)果的探討希望能引起相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定和監(jiān)管部門的重視，增修訂相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，完善藥典附錄， 以真正能達(dá)到評(píng)價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量的目的，并能促進(jìn)相應(yīng)的生產(chǎn)和工藝改進(jìn)， 提高該類產(chǎn)品的質(zhì)量水平。